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生物素标记蛋白

生物素与亲和素/链霉亲和素的结合具有高度特异性和稳定性,两者的亲和常数比抗原-抗体反应高10-100万倍,这使得它成为蛋白质生物化学中的一个非常好的工具。然而,高质量的生物素标记蛋白的生产目前是一个重大的挑战。研究人员经常遇到的技术问题,包括不能充分标记,高批次间差异,和不可预知的性能表现。此外,生物素标记方法的选择也会显著影响最终的结果。每一个目标蛋白都有着自己独特的生化特性,因此需要定制化的解决方案。

这些复杂的因素使得个人实验室很难制造和使用生物素结合物,同时,很少有商业化的产品可供购买。为了填补这一空白,ACROBiosystems公司开发出了一系列独家的预先标记且经实验验证的生物素标记重组蛋白。MABSOL®生物素标记蛋白包含超过上百种常用的药物靶点和生物标志物蛋白。我们以高质量的人源细胞表达的蛋白为原料,每一步都经过充分考量,以达到较高的生物活性和检测灵敏度。我们还使用严格的质量控制,以确保较小的批次间差异

MABSOL®生物素标记蛋白系列包括两个独特的互补产品系列,分别是建立在Avitag™技术上的PrecisionAvi系列(查看产品列表),和使用内部开发的化学标记法的UltraLys系列(查看产品列表)。具有严格的细节要求和质量检测标准

PrecisionAvi系列

靶点酶
靶点酶
工具酶
工具酶
mRNA合成和修饰酶
mRNA合成和修饰酶

酶通过调节化学反应的速率,在生物体中充当生物催化剂,而自身在此过程中不会发生改变。酶充当药物的靶标以获得所需的治疗效果,因此被称为生物靶标。酶为药物设计提供了独特的机会,这是细胞表面受体、核激素受体、离子通道、转运体所不具备的。用作酶抑制剂的药物构成了当今临床使用的口服生物可利用治疗剂的重要部分。

ACROBiosystems百普赛斯作为药物开发用重组蛋白的行业领导者,致力于“从靶点蛋白开始,为更好生物医药”,开发了一系列靶点酶产品,包括但不限于腺苷酸通路靶点、基质金属蛋白酶、组织蛋白酶、激酶等,助力相关药物及疗法的开发。

UltraLys系列

mRNA合成过程中,通过Vaccinia Capping System对mRNA的5'端进行加帽修饰,并使用Poly(A)Polymerase在3'端进行加尾修饰。为了提高翻译效率、增强稳定性,并抑制不良反应,选择了高活性的T7 RNA Polymerase和经过突变的核糖核酸单体。

ACROBiosystems百普赛斯针对mRNA合成和修饰的挑战开发了一系列工具酶产品。这些产品包括Poly(A)Polymerase、T7 RNA Polymerase、Pyrophosphatase、RNase Inhibitor和DNase I等,它们具有高纯度、高活性、低内毒素、无重金属和宿主酶残留等特点。这些工具酶产品能够解决mRNA产品开发中的多个难题,如提高加帽效率、统一加尾序列、增强合成序列的稳定性以及促进脂质体进入细胞等方面。

mRNA合成和修饰酶
产品特点
高纯度经验证
高活性经验证
低内毒素
无重金属和宿主酶残留
图3. 定向固定和随机固定的比较实验结果显示,通过预先包被在96孔板上的链霉亲和素固定的生物素标记CD155(Cat. No. CD5-H82E3)和直接包被在96孔板上的非生物素标记的CD155(Cat. No. CD5-H5223)相比,前者结合TIGIT( Cat. No. TIT-H5254)的活性更高。
AlphaLISA
图 4. AlphaLisa检测生物素标记的Human PD-1(Cat. No. PD1-H82F1)与PDL1 (Cat. No. PD1-H5229) 的结合活性,线性区间为0.02-0.625 μg/mL。
图 5. AlphaLISA检测生物素标记的Human PD-1(Cat. No. PD1-H82F1)与PDL2 (Cat. No. PD2-H5220) 的结合活性,线性区间为0.02-0.625 μg/mL。
SPR
图 6. 在SPR实验中,将生物素标记的human VEGF165 (Cat. No. VE5-H82Q0)通过链霉亲和素固定在CM5芯片上,其与Avastin结合的亲和常数是0.417nM(Biacore T200)。
BLI
图7. 在BLI实验中,将生物素标记的 PD-1 (Cat. No. PD1-H82E4) 固定在SA传感器上,可以结合Human PD-L2,亲和常数为2.4 μM (ForteBio Octet Red96e)
Cell based assay
图 8. 重组human TNF-alpha介导的对WEH1-13VAR细胞的细胞毒性实验,EC50为0.014-0.029 ng/ml。结果显示生物素标记的human TNF-alpha与非生物素标记的TNF-alpha表现一致。

高批间一致

我们通过严格的质量控制确保产品的批间一致性。每一个产品不同批次会通过多种实验方法以我们内部标准进行并行对比,只有差异在可接受范围内的产品才会被放行。就像图9. ELISA分析对比三个不同批次生物素标记的Human TNF-alpha(Cat. No. TNA-H82E3)和Adalimumab的结合,结果显示这些样品批次间差异可忽略。在细胞水平的实验中,产品同样具有很好的批间一致性(如图10所示)。

图 9. 在上述ELISA 实验中, 检测3个不同批次的生物素标记的human TNF-alpha (Cat. No. TNA-H82E3)与Adalimumab 的结合,结果显示被检样品的批间差异性很小。
图 10. 用代谢抑制剂放线菌素D及重组生物素标记的human TNF-alpha (Cat. No. TNA-H82E3) 介导的对WEH1-13VAR细胞的细胞毒性实验(EC50为0.029-0.052 ng/ml),两批TNF-alpha表现一致。

产品应用

核酸工具酶种类繁多、功能各异,主要包括限制酶、聚合酶、连接酶、修饰酶和核酸酶等。这些酶具有特异性的序列识别能力以及高效的催化活性,在一定的条件下可以对核酸进行切割、连接、扩增及修饰等,反应条件温和且具有出色的生物相容性,因此,被广泛地应用于核酸、蛋白质和小分子等生物活性分子的分析检测。ACROBiosystems作为领先的重组蛋白供应商隆重推出包括全能核酸酶、CAS9、CAS12a等CAS系列核酸酶等,应用于细胞与基因工程以及对生物制品的安全性监管。

此外,ACROBiosystems百普赛斯可提供一系列高特异性工具酶,用于抗体片段化、糖基化,进一步分析抗体药结构,及其功能之间的关系,助力生物药物的开发和质量控制。

工具酶
产品特点
高纯度:高纯度经SDS-PAGE(>95%)及SEC-MALS验证
经验证的高稳定性,保证产品质量
经验证的高酶活
无外源性病毒污染
特色产品
全能核酸酶
全能核酸酶
CRISPR-Cas核酸酶
CRISPR-Cas核酸酶
抗体理化分析工具酶
抗体理化分析工具酶
> 核酸酶
类型 分子 货号 产品描述
全能核酸酶 Nuclease HOT BEE-N3116 GENIUS™Nuclease DMF Filed
Nuclease HOT NUE-S5119 GENIUS™ Nuclease, premium grade
Nuclease HOT GMP-NUES19 GMP GENIUS™Nuclease DMF Filed
CRISPR-Cas核酸酶 cas9 CA9-S5149 GENPower™ NLS-Cas9 Nuclease (MALS verified)
Cas12a CAA-L5140 GENPower™ NLS-Cas12a Nuclease (MALS verified)
Cas12a CAA-L5149 NLS-Cas12a Nuclease (MALS verified)
> 蛋白酶
类型 分子 货号 产品描述 应用
蛋白酶 3C(HRV) HOT 3CC-N3133 HRV-3C Protease Cleavage Enzyme, GST Tag (active enzyme) 切除融合蛋白上亲和标签
抗体理化分析 IdeS IDS-S5143 IdeS (20U/μl) 特异性识别IgG,在抗体下铰链区的特定位点进行酶切,使IgG水解为完整的F(ab’)2片段和Fc片段
SpeB SPB-S5115 SpeB (40U/μl) 在还原条件下消化多物种来源和亚型抗体的铰链区,产生Fab与Fc片段
Endo H ENH-S5116 Endo H (500U/μl) 对N-糖蛋白中的高甘露糖和某些杂合型寡聚糖的核心壳二糖核心进行切割,而不切割复杂多糖,确定抗体的糖基化状态
EndoS ENS-S5143 Endo S (200U/μl) 特异性水解天然 IgG Fc 区域中的 N 连接聚糖
应用案例
体外高酶活验证
NLS-Cas12a Nuclease (MALS verified)(货号:CAA-L5149 ),体外DNA底物切割效率>90%,与竞品相当。
CRISPR12a体外DNA底物切割效率测定结果
Measured by its ability to cleave a targeted DNA substrate. Cas12a achieves >90% substrate cleavage, comparable to competing products
高生物活性
Nuclease全能核酸酶生物活性高于竞品
GENIUS™ Nuclease, premium grade(Cat. No. NUE-S5119)比竞品具有更高的生物活性(>1.2 x 10e6 units/mg)
高批间一致性
Nuclease全能核酸酶生物活性高于竞品
Nuclease全能核酸酶生物活性高于竞品
GENIUS™ Nuclease, premium grade(Cat. No. NUE-S5119)不同批次的生物保持一致,具有高批间一致性。

产品特征

高生物活性和检测灵敏度

生物素标记蛋白的生物活性由蛋白自身结构和生物素标记方式决定。我们测试了多种标签和生物素标记方法,用多种结合实验进行产品评估,选择表现最好的蛋白进行生产。图1为内部评估实验举例。

mabsol-img.jpg
图 1.功能性ELISA检测不同形式的生物素标记的PD1和rhPD-L1(Cat. No.PD1-H5258)的结合能力。

我们的生物素标记蛋白在不同的应用中均具有高生物活性和极好的检测灵敏度。图2功能性ELISA实验中,生物素标记的人TACI蛋白与BAFF有较高的结合活性。图3是定向固定和随机固定两种ELISA方法的比较,结果显示通过链霉亲和素定向固定的生物素标记的CD155比随机固定的非生物素标记CD155具有更高的检测灵敏度。图4和图5实验结果表明生物素标记的PD1可以很好地应用于AlphaLISA检测其与配体PD-L1及PD-L2的结合活性。图6和图7 SPR实验中可以看出,生物素标记蛋白可以很好的用于检测蛋白与治疗性抗体的亲和力。此外,生物素标记蛋白也经常用于细胞实验中,如细胞毒性实验及CAR表达阳性率检测实验(如图8和图9所示)。

ELISA
图2. ELISA 检测生物素标记的Human TAIC (Cat. No. TAI-H82F6) 与 BAFF (Cat. No. BAF-H5261)的结合活性,线性区间为0.002-0.05 μg/mL.

部分引用文献


Integration of a CD19 CAR into the TCR Alpha Chain Locus Streamlines Production of Allogeneic Gene-Edited CAR T Cells


Authors: MacLeod DT et al.

Journal: Mol Ther 2017

Product: biotinylated Human CD19(Cat. # CD9-H8259

Application: Flow Cytometry

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Quantification of active infliximab in human serum with liquid chromatography-tandem mass spectrometry using a tumor necrosis factor alpha -based pre-analytical sample purification and a stable isotopic labeled infliximab bio-similar as internal standard: A target-based, sensitive and cost-effective method

Authors: El Amrani M et al.

Journal: J Chromatogr A 2016

Product: biotinylated human recombinant TNF-alpha(Cat. # TNA-H8211

Application: ELISA

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ANTIBODY-DRUG CONJUGATE HAVING IMPROVED STABILITY AND USE THEREOF

Authors: Kim Young Min et al.

Journal: United States Patent Application 20160136300 2016

Product: ErbB2(Cat. # HE2-H822R

Application: ELISA

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Microsphere-based immunoassay integrated with a microfluidic network to perform logic operations

Authors: Pooja Sabhachandani et al.

Journal: Microchimica Acta 2015

Product: biotinylated human TNF-α(Cat. # TNA-H8211

Application: Microsphere-based assay

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NOVEL CELL LINE SCREENING METHOD

Authors: YU et al.

Journal: United States Patent Application 20140155285 2014

Product: biotinylated TNFα(Cat. # TNA-H8211

Application: Flow Cytometry

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  • 背景
  • PrecisionAvi系列
  • UltraLys系列
  • 产品应用
  • 产品特征
  • 部分引用文献